Információ

9.4: Az emberi kromoszóma rendellenességek diagnosztizálása – Biológia


Bright Field Mikroszkópia

Hogyan erősíthetjük meg, hogy egy személynek specifikus kromoszóma-rendellenessége van? Az első módszer egyszerűen az volt, hogy mintát vettek a sejtekből, és megfestették a kromoszómákat Giemsa festéket, és vizsgálja meg az eredményeket fénymikroszkóppal ((PageIndex{1}) ábra). Minden kromoszóma felismerhető a hosszáról, a centromerének elhelyezkedéséről és a Giemsa által termelt lila sávok jellegzetes mintázatáról. Például, ha egy személy mitotikus sejtjei folyamatosan negyvenhét kromoszómát tartalmaznak összesen három 21-es kromoszómával, ez Down-szindrómára utal. A fényerejű mikroszkópiának azonban megvannak a korlátai – csak mitotikus kromoszómákkal működik, és sok kromoszóma-átrendeződés túl finom vagy túl bonyolult ahhoz, hogy még egy képzett citogenetikus is észrevegye.

Fluoreszcencia In Situ hibridizáció

A megoldás ezekre a problémákra az volt fluoreszcencia in situ hibridizáció (HAL). A technika hasonló a Southern blothoz, mivel egyszálú DNS-szonda hagyjuk hibridizálni a denaturált cél-DNS-hez (lásd 8.6. szakasz). Azonban ahelyett, hogy a próba radioaktív lenne, fluoreszcens, és a cél-DNS helyett nejlon membránon lévő restrikciós fragmentumok, hanem denaturált kromoszómák egy tárgylemezen. Mivel több fluoreszkáló szín is elérhető, gyakori, hogy egynél több szondát használnak egyszerre. Jellemzően a kromoszómákat egy fluoreszcens festéssel is megjelölik, az úgynevezett DAPI ami egységes kék színt ad nekik. Ha a kromoszómák mitotikus sejtből származnak, látható, hogy mind a negyvenhat egy kis területen szétterül. Alternatív megoldásként, ha a kromoszómák egy interfázisú sejt magjában vannak, együtt jelennek meg egy nagy kék körben.

A FISH használata a Down-szindróma diagnosztizálására

A legtöbb terhesség egészséges gyermeket eredményez. Bizonyos esetekben azonban nagyobb az esélye annak, hogy a magzat 21-es triszómiában szenved. Az idősebb nők nagyobb kockázatnak vannak kitéve, mivel az életkor előrehaladtával gyakoribbá válnak a triszómiához vezető non-disjunktion események. A második szempont az, hogy hogyan néz ki a magzat az ultrahangos vizsgálat során. A 21-es triszómiában és néhány más kromoszóma-rendellenességben szenvedő magzatoknál a nyak hátsó részén duzzanat, amelyet nyaki áttetszőségnek neveznek. Ha valamelyik vagy mindkét tényező jelen van, a nő választhatja a magzatvíz vizsgálatát. Ebben a vizsgálatban némi magzatvizet eltávolítanak, hogy a benne lévő magzati sejteket meg lehessen vizsgálni. A (PageIndex{2}) ábra a 21-es triszómia pozitív eredményét mutatja. A kép alapján a magzatnak két X-kromoszómája és három 21-es kromoszómája van, ezért kariotípusa 47,XX,+21.

A FISH használata a Cri-du-Chat szindróma diagnosztizálására

Az orvos gyaníthatja, hogy a páciensnek bizonyos genetikai állapota van a páciens fizikai megjelenése, mentális képességei, egészségügyi problémái és egyéb tényezők alapján. A FISH segítségével megerősíthető a diagnózis. Például a (PageIndex{3}) ábra pozitív eredményt mutat a cri-du-chat szindróma esetében. A szondák az 5. kromoszóma két hosszú karjához kötődnek, de csak egy rövid karhoz. Ezért az egyik 5-ös kromoszómának hiányoznia kell egy része a rövid karjából.

Újabb technikák

A FISH egy elegáns technika, amely drámai képeket készít kromoszómáinkról. Sajnos a FISH is drága, időigényes, és nagyfokú szakértelmet igényel. Ezen okok miatt a FISH-t lassan felváltják a PCR és DNS chip alapú módszerek. Ezeknek a technikáknak olyan változatait fejlesztették ki, amelyekkel pontosan lehet számszerűsíteni egy személy DNS-ét. Például egy Down-szindrómás személytől származó DNS-minta 150%-kal több DNS-t tartalmaz a 21-es kromoszómából, mint a többi kromoszóma. Hasonlóképpen, a cri-du-chat szindrómában szenvedő személy DNS-e 50%-kal kevesebb DNS-t tartalmaz az 5. kromoszóma végéről. Ezek a technikák nagyon hasznosak, ha a feltételezett rendellenesség deléció, duplikáció vagy kromoszómaszám változás. Kevésbé hasznosak a kromoszóma inverziók és transzlokációk diagnosztizálására, mivel ezek az átrendeződések gyakran nem járnak gének nettó elvesztésével vagy gyarapodásával.

A jövőben valószínűleg ezeket a technikákat DNS-szekvenálással váltják fel. A genomszekvenáló gépek minden új generációja több DNS-t tud szekvenálni rövidebb idő alatt. Végül olcsóbb lesz pusztán a páciens teljes genomjának szekvenálása, mint FISH-t vagy PCR-t használni specifikus kromoszóma-defektusok vizsgálatára.


Ez az imádnivaló szoptatós csecsemő (9.4.1. ábra) egy pozitív visszacsatolási kör része. Amikor szoptatja a mellbimbót, az idegimpulzusokat küld anyja hipotalamuszába. Ezek az idegimpulzusok „utasítják” az agyalapi mirigyét, hogy engedje fel a prolaktin hormont a véráramba. A prolaktin eljut az emlőmirigyekbe, és serkenti a tejtermelést, ami arra készteti a csecsemőt, hogy folytassa a szopást.

Az agyalapi mirigy az endokrin rendszer mestermirigye, amely azon mirigyek rendszere, amelyek hormonokat választanak ki a véráramba. Az endokrin hormonok gyakorlatilag minden élettani folyamatot irányítanak. Szabályozzák a növekedést, a szexuális érést, a szaporodást, a testhőmérsékletet, a vérnyomást és az anyagcserét. Az agyalapi mirigyet az endokrin rendszer fő mirigyének tekintik, mivel ez szabályozza az endokrin rendszer többi részét. Sok agyalapi mirigy hormon elősegíti vagy gátolja más endokrin mirigyek hormontermelését.


9.5.2 ábra A pajzsmirigy egy kétkaréjos mirigy a nyak elején.

Az pajzsmirigy az egyik legnagyobb endokrin mirigy a szervezetben. A nyak elülső részén, az ádámcsutka alatt található (lásd a 9.5.2. ábrát). A mirigy pillangó alakú és két lebenyből áll. A lebenyeket egy keskeny pajzsmirigyszövet köti össze, amelyet isthmusnak neveznek.

Belsőleg a pajzsmirigy főként tüszőkből áll. A mirigy egy központi üreget körülvevő kis sejtcsoport, amely a tüszősejtek által termelt hormonokat és egyéb molekulákat tárolja. A pajzsmirigy tüszősejtjei egyedülállóak abban, hogy rendkívül specializálódtak a jód felszívására és felhasználására. Jodidionként (I-) szívják fel a jódot a vérből, és a jodidot pajzsmirigyhormonok előállítására használják fel. A sejtek az általuk felvett jodid egy részét is felhasználják egy úgynevezett fehérje kialakítására tiroglobulin , amely a jodid tárolására szolgál a későbbi hormonszintézishez. Az egyes tüszők sejtjeinek külső rétege szükség szerint pajzsmirigyhormonokat választ ki. A tüszők között szétszórva vannak egy másik típusú pajzsmirigysejtek, az ún parafollikuláris sejtek (vagy C-sejtek). Ezek a sejtek szintetizálják és kiválasztják a kalcitonin hormont.


9.4: Az emberi kromoszóma rendellenességek diagnosztizálása – Biológia

Az ilyen meiózisból származó tojások egyike mindkét X-kromoszómát megkaphatja, a másik pedig nem kapna X-kromoszómát.

Ha ezeket a petesejteket ezt követően normális spermiummal megtermékenyítik, különféle nemi kromoszóma aneuploidiák léphetnek fel:

XXY – steril férfi, akinek bizonyos női testjellemzői lehetnek, és bizonyos esetekben megnövekedett tanulási akadályok is lehetnek.
(További információért látogasson el az Országos Egészségügyi Intézet webhelyére a Klinefelter-szindróma megértése, Útmutató XXY férfiaknak és családjaiknak címen: http://www.nih.gov/health/chip/nichd/klinefelter/)

XXX – Nincsenek valódi stigmák ehhez a szindrómához. A hármas X-szel rendelkező nők általában termékenyek.

XO - steril nőstény, alacsony termetű, alacsony szellemi képességű, nem esik át pubertáskor (Turner-szindróma).

YO – A fejlődéshez és a túléléshez szükséges életképtelen gének az X kromoszómán.

A spermiumtermelés során bekövetkező szétválasztás a nemi kromoszómák aneuploidiáját is eredményezheti.


Az emberi kromoszómák tömege mérve

Először mérték meg az emberi kromoszómák tömegét.

Az emberi kromoszómák tömegét, amelyek testünk szinte minden sejtjében tartalmazzák az életre vonatkozó utasításokat, először mérték meg röntgensugárzással az UCL kutatói által vezetett új tanulmányban.

A ben megjelent tanulmányhoz Kromoszóma kutatás, a kutatók az Egyesült Királyság nemzeti szinkrotron létesítményében, a Diamond Light Source-ban egy erős röntgensugarat használtak, hogy meghatározzák az elektronok számát egy 46 kromoszóma terjedésében, amelyet a tömeg kiszámításához használtak.

Azt találták, hogy a kromoszómák körülbelül 20-szor nehezebbek, mint a bennük lévő DNS – a korábban vártnál sokkal nagyobb tömeg, ami azt sugallja, hogy hiányzó komponensek még felfedezésre várnak.

A DNS mellett a kromoszómák olyan fehérjékből állnak, amelyek különféle funkciókat látnak el, a DNS leolvasásától a sejtosztódási folyamatok szabályozásáig, egészen a kétméteres DNS-szálak sejtjeinkbe való szoros csomagolásáig.

Ian Robinson professzor, vezető szerző (UCL Londoni Nanotechnológiai Központ) azt mondta: "A tudósok 130 éve vizsgálják a kromoszómákat, de ezeknek az összetett struktúráknak még mindig vannak olyan részei, amelyeket rosszul ismernek.

"A DNS tömegét a Human Genome Projectből ismerjük, de ez az első alkalom, hogy sikerült pontosan megmérnünk a DNS-t tartalmazó kromoszómák tömegét.

"Mérésünk szerint minden sejtünk 46 kromoszómája 242 pikogrammot (gramm billiód része) nyom. Ez nehezebb, mint azt várnánk, és ha megismételjük, megmagyarázhatatlan többlettömegre utal a kromoszómákban."

A tanulmány során a kutatók a röntgenptychographiának nevezett módszert alkalmazták, amely a röntgensugár kromoszómákon való áthaladásakor keletkező diffrakciós mintázatok összefűzését foglalja magában, hogy rendkívül érzékeny 3D-s rekonstrukciót hozzanak létre. A finom felbontás azért volt lehetséges, mert a gyémánt fényforrásnál kihelyezett nyaláb milliárdszor fényesebb volt, mint a Nap (azaz nagyon sok foton haladt át egy adott időpontban).

A kromoszómák metafázisban készültek, közvetlenül azelőtt, hogy két leánysejtre osztódnának. Ez az, amikor a csomagoló fehérjék nagyon kompakt, precíz szerkezetekké csavarják fel a DNS-t.

Archana Bhartiya, az UCL Londoni Nanotechnológiai Központjának PhD hallgatója és a tanulmány vezető szerzője elmondta: "A kromoszómák jobb megértése fontos hatással lehet az emberi egészségre.

"Számos mennyiségű kromoszómát vizsgálnak orvosi laboratóriumokban, hogy a betegek mintáiból diagnosztizálják a rákot. Ezért a kromoszómák leképezésére irányuló képességeink bármilyen fejlesztése nagyon értékes lenne."

Minden emberi sejt metafázisban általában 23 pár kromoszómát tartalmaz, azaz összesen 46-ot. Ezeken belül 3,5 milliárd bázispárnyi DNS négy másolata található.

A kutatást a Diamond Light Source, az UKRI, a Biotechnology and Biological Sciences Research Council (BBSRC), a Mérnöki és Fizikai Tudományok Kutatási Tanácsa (EPSRC), az Európai Kutatási Tanács és az Egyesült Államok Energiaügyi Minisztériuma támogatta.


Tartalom

A rendellenes számú kromoszómát aneuploidiának nevezzük, és akkor fordul elő, ha az egyénnek vagy hiányzik egy kromoszóma egy párból (ami monoszómiát eredményez), vagy kettőnél több kromoszómája van egy párnak (triszómia, tetraszómia stb.). [3] [4] Az aneuploidia lehet teljes, egy teljes kromoszóma hiányával vagy hozzáadásával, vagy részleges, amikor a kromoszómának csak egy része hiányzik vagy hozzáadódik. [3] Aneuploidia előfordulhat nemi kromoszómákkal vagy autoszómákkal.

Az embereknél előforduló triszómiára példa a Down-szindróma, amely a 21-es kromoszóma egy extra kópiája által okozott fejlődési rendellenesség, ezért a rendellenességet 21-es triszómiának is nevezik. [5]

Az emberi monoszómiára példa a Turner-szindróma, amikor az egyén csak egy nemi kromoszómával, egy X-szel születik [6].

Sperma aneuploidia Szerkesztés

A hímek bizonyos életmódbeli, környezeti és/vagy foglalkozási veszélyeknek való kitettsége növelheti az aneuploid spermiumok kialakulásának kockázatát. [7] Az aneuploidia kockázatát különösen a dohányzás, [8] [9] és a benzol, [10] inszekticidek, [11] [12] és perfluorozott vegyületek munkahelyi expozíciója növeli. [13] A megnövekedett aneuploidia gyakran összefüggésbe hozható a spermiumok fokozott DNS-károsodásával.

Ha a kromoszóma szerkezete megváltozik, annak többféle formája lehet: [14]

    : A kromoszóma egy része hiányzik vagy törölve lett. Az emberekben ismert rendellenességek közé tartozik a Wolf-Hirschhorn-szindróma, amelyet a 4-es kromoszóma rövid karjának részleges deléciója okoz, és a Jacobsen-szindróma, amelyet terminális 11q deléciós rendellenességnek is neveznek. : A kromoszóma egy része megkettőződött, ami extra genetikai anyagot eredményez. Az ismert emberi rendellenességek közé tartozik az 1A típusú Charcot-Marie-Tooth betegség, amelyet a 17-es kromoszómán a 22-es perifériás mielinproteint (PMP22) kódoló gén megkettőzése okozhat. , ezért a genetikai anyag fordított. : Az egyik kromoszóma egy részét törölték normál helyéről, és egy másik kromoszómába helyezték be. : Az egyik kromoszóma egy része átkerült egy másik kromoszómába. A transzlokációnak két fő típusa van:
      : Két különböző kromoszómából származó szegmensek kicserélődtek. : Egy egész kromoszóma egy másikhoz kapcsolódott a centromeren – emberben ezek csak a 13., 14., 15., 21. és 22. kromoszómákkal fordulnak elő.

    A kromoszóma-instabilitási szindrómák olyan rendellenességek csoportját jelentik, amelyeket kromoszómainstabilitás és -törés jellemez. Gyakran bizonyos típusú rosszindulatú daganatok kialakulásának fokozott hajlamához vezetnek.

    A legtöbb kromoszóma-rendellenesség balesetként jelentkezik a petesejtben vagy a spermiumban, ezért az anomália a test minden sejtjében jelen van. Néhány anomália azonban előfordulhat a fogantatás után is, ami mozaikizmust eredményez (ahol egyes sejtekben van anomália, másokban pedig nem). A kromoszóma anomáliák örökölhetők a szülőtől, vagy „de novo” is lehetnek. Ez az oka annak, hogy gyakran végeznek kromoszómavizsgálatokat a szülőkön, amikor a gyermeknél rendellenességet észlelnek. Ha a szülők nem rendelkeznek a rendellenességgel, akkor az eredetileg nem öröklődött, de átadható a következő generációknak.

    A legtöbb rák, ha nem is az összes, kromoszóma-rendellenességeket okozhat [15] hibrid gének és fúziós fehérjék képződésével, a gének deregulációjával és a fehérjék túlzott expressziójával, vagy a tumorszuppresszor gének elvesztésével (lásd a "Mitelman Database" [16]) valamint a Genetics and Cytogenetics in Oncology and Hematology atlasza [17]). Ezenkívül bizonyos következetes kromoszóma-rendellenességek a normál sejteket leukémiás sejtté változtathatják, mint például egy gén transzlokációja, ami annak nem megfelelő expresszióját eredményezi. [18]

    Az emlős gametogenezis mitotikus és meiotikus sejtosztódása során a DNS-javítás hatékonyan távolítja el a DNS-károsodásokat. [19] A spermatogenezisben azonban a DNS-károsodások helyreállításának képessége jelentősen csökken a folyamat utolsó szakaszában, mivel a haploid spermatidák jelentős nukleáris kromatin átalakuláson mennek keresztül erősen tömörített spermiummagokká. Marchetti és munkatársai [20] szerint a spermiumfejlődés utolsó néhány hetében a megtermékenyítés előtt nagyon érzékenyek a spermium DNS-károsodás felhalmozódására. Az ilyen spermium-DNS-károsodás javítatlanul átkerülhet a tojásba, ahol az anyai helyreállító gépezet eltávolítja. A spermium-DNS-károsodás anyai DNS-javításának hibái azonban kromoszómaszerkezeti rendellenességekkel rendelkező zigótákat eredményezhetnek.

    A melfalán egy bifunkciós alkilezőszer, amelyet gyakran használnak a kemoterápiában. A melfalán által okozott meiotikus szálak közötti DNS-károsodások elkerülhetik az apai helyreállítást, és kromoszóma-rendellenességeket okozhatnak a zigótában az anyai hibás javítás következtében. [20] Így a megtermékenyítés előtti és utáni DNS-javítás egyaránt fontosnak tűnik a kromoszóma-rendellenességek elkerülésében és a fogalom genomintegritásának biztosításában.

    Attól függően, hogy milyen információt akarunk megszerezni, különböző technikákra és mintákra van szükség.


    Genotípus-első megközelítés a diagnózishoz

    A közelmúltban azonosított szindrómák közül sokat a genotípus-első megközelítéssel azonosítottak, nem pedig egy tipikus fenotípus-első megközelítéssel.6 A fenotípus-első megközelítésben az okos klinikus a klinikai megjelenés alapján gyűjti össze a betegeket. Ez a megközelítés sok évbe telt néhány ritka egyed megfigyeléséhez és egy szindróma kialakulásához. Az így létrejövő szindrómák fenotípusai nagyon konzisztensek voltak a betegek körében. Ezzel szemben a genotípus-első megközelítés azonosítja az azonos vagy átfedő genomiális elváltozásokkal rendelkező betegeket, majd leírja a megfigyelt fenotípusokat. Ez utóbbi megközelítésben a betegek gyakran eltérő tulajdonságokat mutatnak, és utólag nem lett volna csoportosítva a klinikai megjelenés alapján.

    A közelmúltban a genom ismert szegmentális duplikációjának “hotspots” lekérdezésére tervezett microarray-ek számos korábban fel nem ismert genomi rendellenességet azonosítottak. A 10q22.3q23.3,90,91 15q24,13� 16p11.2p12.2,16 17q21.31,10� és 17q23.2.2 kromoszóma ismétlődő mikrodelécióit azonosították. Az azonosított betegek többsége minden esetben megfelelt a visszatérő genomiális rendellenesség klasszikus definíciójának. A deléciókat szegmentális duplikációk övezték, a deléciók mindig látszólag de novo eredetűek voltak, és a betegek hasonló klinikai jellemzőkkel rendelkeztek.41 Ezeknek a szindrómáknak a klinikai jellemzői azonban általában nem idéznek elő diagnosztikus Gestalt, ami a genotípus hasznosságát bizonyítja. -első megközelítés feltűnő klinikai jellemzők hiányában.

    A genotípus-első megközelítés lehetővé teheti a kis deléciók vagy duplikációk azonosítását is, amelyek felfedik a specifikus klinikai jellemzők okozó génjeit, ami elősegítheti a diagnózist és a prognózist. Például a kutatók a közelmúltban azonosították, mi lehet a 2q32q33 mikrodeléciós szindróma jellemzőinek kiváltó génje.92 A szindrómában szenvedő egyének súlyos mentális retardációval, növekedési retardációval, dysmorf arcvonásokkal, vékony és ritka szőrrel, táplálkozási nehézségekkel, valamint repedezett vagy erősen magas hajjal rendelkeznek. szájpadlás. Bár különböző méretű deléciókról számoltak be, az összes betegben törölt legkisebb régió legalább hét gént tartalmaz. Az egyik ilyen gén, SATB2, egy DNS-kötő fehérje, amely szabályozza a gének expresszióját. törlése SATB2 Feltételezték, hogy a 2q32q33 mikrodeléciós szindrómában szenvedő egyéneknél szájpadhasadékot vagy magas szájpadlást okoz. A közelmúltban végzett tanulmány három olyan személyt azonosított, amelyekben a régió kis deléciói voltak, amelyek mindegyike átfogta a régió egy részét SATB2. Ezeknek az egyéneknek a közös klinikai jellemzői közé tartozott a súlyos fejlődési késés, a viselkedési problémák és a fogak rendellenességei. Érdekes módon az egyének közül csak egynek volt szájpadlása. Mivel az egyénekből csak egy gén egy része hiányzott, és a nagyobb mikrodeléciós szindrómához kapcsolódó számos jellemző jelenléte, a tanulmány szerzői a SATB2 elegendő volt a 2q32q33 mikrodeléciós szindrómával összefüggő számos klinikai tünet előidézéséhez.92


    Kromoszóma térkép

    Genetikai információinkat 23 kromoszómapár tárolja, amelyek mérete és alakja igen változatos. Az 1. kromoszóma a legnagyobb, és több mint háromszor nagyobb, mint a 22. kromoszóma. A 23. kromoszómapár két speciális kromoszóma, az X és az Y, amelyek meghatározzák a nemünket. A nőknek van egy pár X kromoszómája (46, XX), míg a férfiaknak egy X és egy Y kromoszómája (46, XY). A kromoszómák DNS-ből állnak, a gének pedig a kromoszómális DNS speciális egységei. Mindegyik kromoszóma nagyon hosszú molekula, ezért szorosan a fehérjék köré kell tekerni a hatékony csomagoláshoz.

    Mindegyik kromoszóma középpontja közelében található a centromerája, egy keskeny régió, amely a kromoszómát hosszú karra (q) és rövid karra (p) osztja. A kromoszómákat tovább oszthatjuk speciális foltokkal, amelyek sávos mintázatként ismert csíkokat hoznak létre. Minden kromoszómának külön sávos mintázata van, és minden sáv számozott, hogy segítsen azonosítani a kromoszóma egy adott régióját. A génnek a kromoszóma egy adott sávjához való feltérképezésének ezt a módszerét citogenetikai térképezésnek nevezik. Például a hemoglobin béta gén (HBB) a 11p15.4 kromoszómán található. Ez azt jelenti, hogy a HBB gén a 11-es kromoszóma rövid karján (p) található, és a 15.4 jelű sávban található.

    A DNS-elemzés új technikáinak megjelenésével sokkal részletesebben tudjuk megvizsgálni a kromoszómát. Míg a citogenetikai térképezés madártávlati képet ad a kromoszómáról, a modernebb módszerek sokkal nagyobb felbontásban mutatják ki a DNS-t. A Human Genome Project célja a


    Összegzés

    Népességünkben a kromoszóma rendellenességek a leggyakoribb okai a szellemi retardációnak és a fejlődési zavaroknak. A fenotípusok gyakran összetettek, és a megváltozott szegmensekben több, dózisérzékeny gén növekedésének vagy elvesztésének eredménye. Ezeknek a komplex fenotípusoknak az átfedő deléciókkal történő jellemzése lehetővé tette a szindróma sajátos jellemzőit okozó gének azonosítását. A nagy felbontású technológiák, például a microarray-k alkalmazása lehetővé tette új szindrómák azonosítását genotípus-első megközelítéssel, olyan példátlan gyakorisággal, amelyet a fénymikroszkópon keresztül korábban elképzelni sem lehetett. A citogenetika már nem gyerekcipőben jár, és kialakult egy “új” genomtudomány, amely az új technológiák használatával meghatározta a mentális retardáció, a fejlődési fogyatékosság és a születési rendellenességek okait lakosságunkban.


    Nézd meg a videót: Emberi nyál összetevőinek vizsgálata (Január 2022).